Der p 5 酶聯(lián)免疫試劑盒

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保存方式及穩定性

• 按條件保存的試劑盒保質(zhì)期為 18 個(gè)月 (見(jiàn)盒外失效日期)，所有組分均可常溫運輸。
• 收到試劑盒后，請于 2-8℃作長(cháng)期保存。
• 稀釋后的緩沖液可以?xún)Υ嬖?4℃一周。
• 本試劑盒僅限科學(xué)研究使用。

用戶(hù)自備儀器及耗材

• 18.2MΩ 去離子水或者超純水
• 刻度量筒，離心管
• 清潔緩沖液和試劑制備容器
• 渦旋混合器
• 移液器，槍頭
• 能讀取 450nm 處的吸光度

試驗步驟 —— 方案

在試驗開(kāi)始前請將試劑盒置于室溫 (20-25℃)。

1.使用 18.2MΩ 去離子水或者超純水在干凈的容器中將 10X 的濃縮液制備成 1X 的洗滌緩沖液和樣本稀釋液。?

? 對于一塊板：

洗滌緩沖液：將 6mL 濃縮液加入 54mL 水中 (總體積 60mL)

稀釋緩沖液：將 4mL 濃縮液加入 36mL 水中 (總體積 40mL)

?依據試驗樣本量進(jìn)行稀釋?zhuān)邼舛葮悠吩诩尤肫桨逯靶枰A稀釋。

2.從鋁箔袋中取出檢測板。

3.向 A1-H1 和 A2-H2 孔中加入 100μL 稀釋緩沖液。A1 和 A2 孔中額外添加 80μL 稀釋緩沖液。

4.標準品配制加樣：輕輕渦旋 Der p 5標準品，向孔 A1 和 A2 中加入 20μL。通過(guò)上下移液混勻，然后將 100μL 轉移到孔 B1 和 B2，繼續混勻并稀釋到 F1 和 F2，從孔 F1 和 F2 中取出并丟棄 100μL (剩余 100μL)?？?G1、G2 和 H1、H2 中的稀釋緩沖液將作為空白。

樣本配制加樣：本試劑盒檢測范圍為 3.125-100ng/ml，將樣本用稀釋液稀釋?zhuān)瑥涂准訕?，檢測 OD 值應該落在標準曲線(xiàn)的中段，如果 OD 值在檢測樣本的上端或下端，重新稀釋樣本繼續檢測。

5.蓋上封板膜，室溫避光孵育 1 小時(shí)。每孔 150uL 清洗液，清洗檢測板 3 次。

6.輕輕渦旋生物素化抗體，制備成 1:1000 的檢測抗體。即將 11uL 生物素化抗體加入到 11mL 的稀釋緩沖液中，充分混合，每孔加入 100uL。

7.蓋上封板膜，室溫避光孵育 1 小時(shí)。每孔 150ul 清洗液，清洗檢測板 3 次。

8.輕輕渦旋鏈霉抗生物素化過(guò)氧化物酶，制備成 1:1000 的稀釋液。即將 11μL 鏈霉抗生物素化過(guò)氧化物酶加入到 11mL 的稀釋緩沖液中，充分混合，每孔加入 100uL。

9.蓋上封板膜，室溫避光孵育 1 小時(shí)。每孔 150uL 清洗液，清洗檢測板 3 次。

10.每孔中加入 100μL 底物室溫 (20℃~25℃) 孵育 20min，即向每孔中加入 50μL 終止液 (顏色將變?yōu)辄S色)。

11.輕輕敲擊板以確保均勻性，并在 30 分鐘內于 450nm 處測量吸光度。

檢測性能

• 標準曲線(xiàn)：100-3.125ng/mL
• 最低檢出限：xxx ng/mL
• 空白：OD (450nm)<0.08
• 線(xiàn)性相關(guān)性：R2＞0.98

結果計算

以校準品濃度 (ng/ml) 為橫坐標，對應校準品 OD 值 (檢測孔平均 OD 值減去空白孔 OD 值) 為縱坐標，進(jìn)行四參數曲線(xiàn)擬合，建立標準曲線(xiàn)，將待檢樣品復孔的平均 OD 值代入標準曲線(xiàn)，計算樣本中的 Der p 5濃度值。